Определение прямого билирубина в сыворотке крови

Определение концентрации общего билирубина в сыворотке крови

Определение прямого билирубина в сыворотке крови

Принцип метода: В кислой среде в присутствии диазотированного 2,4-дихлоранилина билирубин образует азосоединение красного цвета. Специфическая смесь детергентов делает возможным надежное и точное определение общего билирубина.

Интенсивность окраски раствора при длине волны 540-560 нм прямо пропорциональна концентрации билирубина в нем.

Линейность метода: 1,7 – 513 мкмоль/л.

Норма:

Сыворотка крови –    1,7-21 мкмоль/л (25-37°С).

Концентрация общего билирубина сохраняется стабильной, при условии непопадании солнечного света на образцы, в сыворотке/ гепаринизированной или ЭДТА-плазме в течение 1 дня при комнатной температуре, при температуре хранения 2-8°С – в течение 7 дней, при температуре –20°С – в течение 3 месяцев.

Оборудование и реагенты:

1)      Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 540-560 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 25-37°С;

2)      Секундомер;

3)      Автоматические пипетки на 25 мкл, 250 мкл и 1000 мкл;

4)      Сыворотка крови/ гепаринизированная или ЭДТА-плазма;

5)      Реагент 1 (детергент в ТРИС-буфере, рН 8,2 8 ммоль/л);

6)      Реагент 2 (соляная кислота 30 ммоль/л, 2,4-дихлорфенол 1 ммоль/л, детергент, диазониевая соль);

7)      Стандарт (раствор билирубина, 100 мкмоль/л);

8)      Дистиллированная вода.

Проведение анализа

Добавить в кюветуОпытная пробаХолостая пробаСтандартная проба
1. Образец (например, сыворотка)25 мкл
2. Стандарт25 мкл
3. Дистиллиро-ванная вода25 мкл
4. Реагент 1.1 мл1 мл1 мл
Перемешать содержимое пробирок, инкубировать 5 мин при 37°С, или 10 мин при 20-25°С. Измерить оптическую плотность А1 против холостой пробы при длине волны 540-560 нм.
5. Реагент 2250 мкл250 мкл250 мкл

Перемешать содержимое каждой пробирки. Инкубировать 10 мин при комнатной температуре или 5 мин при температуре 37°С. Измерить оптическую плотность А2 опытной и стандартной проб против холостой пробы при длине волны 540-560 нм. Вычислить DА = А2 – А1 для образца и стандарта.

Расчет

Расчет по стандарту концентрации общего билирубина в сыворотке крови проводят по формуле:

                                                                        DАопС (мкмоль/л) = ———– ´ Сст,                                                                        DАст

где DА – разность оптических плотностей А1 и А2;

         Сст  – концентрация стандарта (мкмоль/л).

Если концентрация общего билирубина превышает 513 мкмоль/л (точка вне зоны линейности калибровочного графика), анализируемый образец следует развести 1:1 физиологическим раствором и повторить измерение, а полученный результат расчета умножить на 2.

Клинико-диагностическое значение: Билирубин – это продукт распада гемоглобина.

Свободный (неконъюгированный) билирубин совершенно неполярен и почти нерастворим в воде, поэтому для транспортирования его в крови от селезенки к печени образуется комплекс с альбумином.

В печени билирубин конъюгирует с глюкуроновой кислотой, а образующийся комплекс билирубин–глюкуроновая кислота (связанный билирубин) экскретируется в желчные протоки.

Гипербилирубинемия может бить вызвана увеличенным образованием свободного билирубина в результате гемолиза (гемолитическая/ прегепатитная желтуха), повреждения паренхимы печени (паренхиматозная/ интрагепатитная желтуха) или закупорки желчных протоков (обтурационная/ постгепатитная желтуха).

Хроническая врожденная гипербилирубинемия (преобладание свободного билирубина) называется синдромом Гилберта и встречается довольно часто.

https://www.youtube.com/watch?v=7Cf7ER-AL3E

Высокие уровни билирубина наблюдаются у 60-70% новорожденных из-за усиленного послеродового разрушения эритроцитов и отставания в активности ферментов деградации билирубина.

Общепринятые методы анализа определяют либо общий, либо прямой билирубин. Прямой билирубин – это конъюгированный, растворимый в воде билирубин. Следовательно, неконъюгированный  (свободный) билирубин может быть оценен как разница между общим и прямым билирубином.

Источник: https://biohimist.ru/laboratornye-raboty-po-biokhimii/63-laboratornaja-po-biohimii/1166-opredelenie-koncentracii-obshhego-bilirubina-v.html

Определение билирубина в сыворотке крови: какие методы используют – количественное определение, двух волн

Определение прямого билирубина в сыворотке крови

Определение билирубина в сыворотке крови нужно при подозрении на вирусный гепатит, желтухе новорожденного или связанной с разрушением эритроцитов, циррозом печени, опухолью, закупоркой желчных путей камнем. Анализ используется и для контроля за лечением. Проводится несколькими методами, самые распространенные – это химические по Бакальчуку, Ван ден Бергу, Йендрашеку.

К сыворотке крови добавляют реактивы, которые вступают в прямую реакцию или после обработки пробы спиртом (непрямая часть).

Результаты измерений по Йендрашеку в норме: общий билирубин 4-21 мкмоль/л, свободный 6-15 и связанный 2-5 единиц.

Для проведения анализа достаточно 1 дня, при необходимости можно определить содержание пигмента мгновенно методом двух волн в анализаторе (например, Билимет М).

Когда важно определение билирубина в сыворотке крови

Определение билирубина в сыворотке крови используется для:

  • исследования работы печени;
  • постановки диагноза – гепатит на ранней стадии, цирроз, жировое перерождение, алкогольная болезнь печеночной ткани, раковая опухоль печени или метастазы, врожденные нарушения обмена билирубина;
  • выявления ускоренного разрушения эритроцитов при гемолитической анемии (врожденные, аутоиммунные или токсические, после переливания крови);
  • дифференциальной диагностики (отличия) физиологической (естественной) желтухи новорожденного от опасной ядерной энцефалопатии (избыток билирубина откладывается в ядрах головного мозга);
  • выяснения степени закупорки желчных путей при наличии камня, опухоли или воспаления с нарушением оттока желчи;
  • контроля за лечением болезней печени, крови и желчевыводящей системы;
  • оценки повреждающего действия медикаментов.

Схема обмена билирубина

Симптомы, при которых нужно пройти анализ:

  • пожелтение кожи;
  • упорный зуд кожных покровов;
  • потемнение мочи;
  • слабость и утомляемость, ломота в костях, суставах в сочетании с болью, тяжестью в правом подреберье.

Рекомендуем прочитать о том, как меняется билирубин при гепатите. Из статьи вы узнаете о показателях билирубина при разных видах гепатита, в чем опасность высокого уровня билирубина при гепатите, что поможет привести показатель к норме.

А здесь подробнее о том, как правильно сдавать кровь на билирубин.

Диагностическое значение показателя

Показатель билирубина имеет диагностическое значение при:

  • ускоренном гемолизе (разрушении эритроцитов) на фоне анемии, малярии, заражении крови (сепсис);
  • повреждении печени вирусом, алкоголем, ядом – гепатите;
  • гнойнике в печеночной ткани (абсцесс);
  • замещении разрушенной ткани рубцовыми волокнами – цирроз;
  • опухолевом процессе в печени (первичный рак) или метастазировании из других органов;
  • подпеченочной закупорке желчных путей – желчнокаменная болезнь, опухоль поджелудочной железы или панкреатит, холангит, холецистит.

Все эти болезни протекают с повышением общего билирубина, но его фракции (прямая и непрямая часть) растут в разной степени. Поэтому исследование помогает отличить вид желтухи:

  • надпеченочная (гемолитическая),
  • внутрипеченочная (паренхиматозная),
  • подпеченочная (механическая).

Снижение билирубина имеет низкое диагностическое значение и встречается при нарушении правил проведения анализа (употребление алкоголя, кофе, снотворных, антибиотиков, гормонов, противосудорожных). Причиной низких показателей бывает и нахождение в светлом месте сыворотки из венозной крови.

Методы определения билирубина в сыворотке крови

Одного рекомендованного метода (референсного) для определения билирубина в сыворотке крови нет, в разных лабораториях могут использовать такие способы:

  • высокоэффективная жидкостная хроматография – части сыворотки разделяют в приборе на части, помогает сразу выделить свободный и связанный билирубин;
  • электрохимический (например, полярография) – есть возможность очень точно определить пигмент, свободный от белка (опасный, несвязанный);
  • окислительный – при добавлении йода, азотной кислоты, хлорида железа происходит окисление билирубина, потом по его степени оценивают концентрацию, отличаются низкой чувствительностью;
  • сухая химия – в анализаторах находится многослойная пленка, а уровень пигмента определяют по отражению световых волн, что не требует добавления реактивов, дорогостоящее исследование;
  • ферментативный – применяется фермент билирубиноксидаза, который ускоряет превращение билирубина в биливердин, особенностью анализа является возможность сделать при гемолизе пробы (кровь с разрушением эритроцитов);
  • химический – самые распространенный, к образцу сыворотки крови добавляют разные реактивы (кофеин, димексид и другие), их отличает сравнительная дешевизна, при болезнях крови и почек возможны неточные результаты, трудоемкие, так как исследование имеет много этапов

Альтернативой исследованию крови является контактный метод – концентрация билирубина измеряется кожным датчиком по степени пожелтения кожи. Используется преимущественно для контроля за желтухой новорожденных.

Количественное определение билирубина в сыворотке крови

В лабораториях количественное определение билирубина в сыворотке крови чаще всего проводят по методам Бакальчука, Ван ден Берга и Йендрашека.

По Бакальчуку

После добавления сульфаниловой кислоты билирубин окрашивает раствор в розово-фиолетовый цвет. При этом связанный (прямой) билирубин дает окрашивание сразу (прямая реакция), а непрямой (несвязанный) только после добавления спирта. Из-за таких особенностей фракции билирубина и имеют соответствующие названия:

  • непрямой, несвязанный – токсичный для организма, растворим в жирах;
  • прямой, связанный с глюкуроновой кислотой – обезвреженный в печени, растворяется в воде и выводится с мочой.

Реактивы для определения билирубина в сыворотке крови по методу Бакальчука

Уровень билирубина получают сразу после помещения пробирки в аппарат для фотометрии.

По Ван ден Бергу

Принцип определения желчного пигмента по Ван ден Бергу предусматривает такие же реакции, что и по Бакальчуку. Отличие состоит в том, что заранее готовят девять пробирок, используемых в качестве образцов. Полученную окраску пробы визуально сравнивают с цветовым рядом и выбирают наиболее соответствующую.

По методу Йендрашика

Особенность методики состоит в добавлении раствора кофеина для ускорения реакции. Измерение проводят по степени окрашивания раствора в аппарате для фотоколориметрии. Нормой для билирубина считают показатели в мкмоль/л:

  • общий 4-21,
  • свободный 6-15,
  • связанный 2-5.

Смотрите в этом видео об особенностях проведения анализа крови на билирубин, расшифровке результатов:

Методы двух волн

Метод двух волн положен в основу для экспресс-анализа крови, то есть используется при необходимости срочно измерить содержание билирубина в сыворотке. Чаще всего это нужно при нарастающей желтухе новорожденных.

При таком способе можно определить только общий уровень желчного пигмента.

Так как основная часть у ребенка (около 90%) представлена свободной фракцией, то для понимания тактики дальнейшего лечения этого анализа достаточно.

Суть состоит в облучении плазмы крови, полученной из пятки, волнами с разной длиной, гемоглобин поглощает обе, а билирубин только одну. Эту разницу и берут за основу вычислений. Для измерения тонкую пробирку (капилляр) помещают в билирубинометр и нажимают кнопку. Все остальные действия выполняются автоматически и практически мгновенно. Итоговое значение высвечивается на электронном табло.

Билирубинометр

Определение общего билирубина в сыворотке крови: подготовка, что влияет на результат

Определение уровня общего билирубина в сыворотке крови (как и его фракций) относится к очень чувствительным исследованиям, при нарушении правил подготовки и проведения получают недостоверный результат.

Подготовка

Важно придерживаться таких рекомендаций:

  • за 5 дней уточнить у лечащею врача возможность применения медикаментов;
  • за 2 дня нельзя принимать алкоголь и напитки с кофеином, переедать, начинать диету;
  • за сутки не разрешена интенсивная физическая нагрузка и стрессовые перенапряжения;
  • накануне ужин должен быть легким и не позже, чем за 8-10 часов до взятия крови;
  • утром в день исследования можно только пить воду, за 2 часа нельзя курить, за 30 минут избегают волнений и активных движений.

Процедура забора крови

Для сдачи материала для анализа нужно прийти в процедурный кабинет утром (до 11 часов), так как на протяжении дня уровень билирубина меняется. При взятии крови нельзя туго затягивать жгут и активно работать кулаком.

Хранение и транспортировка

Венозная кровь хранится в темном месте при температуре 2-8 градусов не более 8 часов. Ее перевозят в стерильных контейнерах, при транспортировке нельзя допускать сильного встряхивания пробирок.

Из-за повышенных требований к соблюдению правил выполнения анализа лучше всего выбрать лабораторию с хорошей репутацией. Если нужно несколько раз проходить исследование, то рекомендуется это делать в одном и том же учреждении, так как при разных вариантах определения желчного пигмента норма может отличаться.

Контейнеры для хранения и транспортировки крови

Меры предосторожности при исследовании

Перед проведением теста все растворы, которые используются для определения общего билирубина в крови, должны быть подогреты до температуры 37 градусов. На протяжении всего периода исследования необходимо поддерживать стабильный температурный режим.

Что может изменить результат

При определении билирубина в крови следует избегать факторов, влияющих на результат анализа:

  • употребление алкоголя, кофе, жирной пищи;
  • прием успокаивающих и снотворных средств, антидепрессантов;
  • применение Парацетамола и других нестероидных противовоспалительных средств;
  • введение антибиотиков цефалоспоринового ряда (например, Цефтриаксон).

Рекомендуем прочитать о том, как проводится анализ на билирубин у новорожденных. Из статьи вы узнаете, как берут анализ крови на билирубин, причинах отклонения от нормы в крови у младенцев, как привести билирубин к норме.

А здесь подробнее о том, что собой представляет прибор для измерения билирубина у новорожденных.

Определение билирубина в крови проводят разными способами, наиболее распространенный – это химический с добавлением реактивов. На достоверность результатов влияет питание, прием медикаментов, стрессовые и физические перегрузки.

Источник: https://bilirubin.online/opredelenie-bilirubina-v-syvorotke-krovi/

Качественное определение «прямого» и «непрямого» билирубина в сыворотке крови

Определение прямого билирубина в сыворотке крови

Билирубин образуется в организме в результате распада гемоглобина эритроцитов в клетках ретикуло-эндотелиальной системы (печень, селезенка).

Из тканей билирубин поступает в кровь, и как соединение токсичное захватывается печенью, где и обезвреживается путем соединения его с глюкуроновой кислотой, образуя моно- и диглюкурониды.

Транспортируется билирубин к месту обезвреживания в комплексе с белком.

В сыворотке крови содержится два вида билирубина: нерастворимый «непрямой» (в виде комплекса с белками, обеспечивающими транспорт) и растворимый «прямой» (диглюкуронид билирубина). Вместе обе формы составляют общий билирубин.

Принцип метода.

При взаимодействии сульфаниловой кислоты с азотистокислым натрием образуется диазофенилсульфоновая кислота, которая дает со связанным билирубином (хорошо растворимым в воде) розово-фиолетовое окрашивание, а «непрямой» билирубин, в присутствии спирта (спирт переводит «непрямой» билирубин в растворимое состояние) – красно-розовое.

Исследуемый материал и реактивы

1. Сыворотка крови. 2. Диазореактив (свежеприготовленный). 3. Этиловый спирт. 4. Фильтровальная бумага.

Ход работы

А) Обнаружение «прямого» билирубина. На часовое стекло, под которое подложен лист белой бумаги, наносят каплю сыворотки крови, содержащей «прямой» билирубин, добавляют 3 капли свежеприготовленного диазореактива и перемешивают стеклянной палочкой. Образуется характерное для билирубина розово-фиолетовое окрашивание.

Б) Обнаружение «непрямого» билирубина. В пробирку отмеривают 1 мл сыворотки крови, 2 мл этилового спирта и фильтруют. К фильтрату добавляют 5 капель свежеприготовленного диазореактива – появляется красно-розовое окрашивание.

Указания к оформлению лабораторной работы

В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, полученные результаты и сделайте выводы.

Контрольные вопросы

  1. Где и из чего в организме человека образуется билирубин?
  2. Что означают термины «прямой» и «непрямой» билирубин?
  3. Каким путем билирубин выделяется из организма человека?

Лабораторная работа №28

Количественное определение содержания билирубина и его фракций в сыворотке крови

В крови билирубин содержится в небольших, но постоянных количествах: 8-20 мкмоль/л.

В сыворотке крови содержатся две формы билирубина – связанный, или билирубинглюкуронид, хорошо растворимый в воде, и несвязанный, или свободный билирубин, плохо растворимый в воде.

Свободная форма его циркулирует в крови в виде комплекса с альбумином. У здоровых людей 75% общего билирубина сыворотки крови составляет свободный билирубин.

В клинической практике чаще всего приходится встречаться с гипербилирубинемиями различного происхождения. Повышение уровня свободного билирубина в крови встречается при гемолитических желтухах, некоторых анемиях, желтухе новорожденных и др.

Желтухи, связанные с затруднением оттока желчи (механические), сопровождаются повышением уровня глюкуронида билирубина («прямой»).

При паренхиматозных желтухах наблюдается также повышение содержания глюкуронида билирубина, с преобладанием однако моноглюкуронида.

Принцип метода.

При добавлении к сыворотке крови кофеинового реактива свободный билирубин переходит в растворимое диссоциированное состояние, благодаря чему он вызывает розово-фиолетовое окрашивание раствора со смесью диазореактивов. По интенсивности окрашивания последнего фотометрически определяют концентрацию общего билирубина. По разнице между содержанием общего и связанного билирубина находят количество свободного.

Исследуемый материал и реактивы

1. Сыворотка крови. 2. Диазореактив I. 3. Диазореактив II. 4. Кофеиновый реактив. 5. Физиологический раствор хлорида натрия.

Ход работы

Перед работой готовят диазосмесь: смешивают 10 мл диазореактива I и 0,3 мл диазореактива II. В три пробирки (1 – для определения уровня общего билирубина, 2 – связанного билирубина и 3 – контрольной пробы на цвет сыворотки) вводят реактивы согласно схеме:

Реактив, мл Общий билирубин Конъюгированный (связанный) билирубин Контрольная проба
Сыворотка 0,25 0,25 0,25
Кофеиновый реактив 1,75 1,75
Физиологический раствор 1,75 1,75
Диазосмесь 0,25 0,25

При определении уровня общего билирубина пробу оставляют при комнатной температуре на 20 мин для развития окраски. В дальнейшем окраска пробы не изменяется. Для установления содержания коньюгированного (связанного) билирубина колориметрирование осуществляют спустя 5–10 мин после добавления диазосмеси, так как при длительном стоянии пробы в реакцию вступает свободный билирубин.

Колориметрируют опытные пробы против контроля при зеленом светофильтре (500–560 нм) в кювете шириной 5мм. Оценку результатов производят по калибровочному графику. В норме концентрация общего билирубина в плазме (сыворотке) крови составляет 8,55-20,52 мкмоль/л, 75% его количества приходится на долю свободного билирубина.

Калибровочный график для определения билирубина крови

Указания к оформлению лабораторной работы

В таблицу показателей норм основных клинико-биохимических исследований впишите нормальные значения концентрации билирубина в крови.

В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, полученные результаты – концентрации общего и конъюгированного билирубина и сделайте выводы о причинах возможного отклонения этих показателей от нормы в исследуемом материале.

Контрольные вопросы

  1. Назовите нормальную концентрацию билирубина в крови человека.
  2. Перечислите причины гипербилирубинемии.
  3. Для каких целей в клинике определяют количественное содержание билирубина в крови человека?

Лабораторная работа №29



Источник: https://infopedia.su/16x7c70.html

Билирубин общий

Определение прямого билирубина в сыворотке крови

[06-036] Билирубин общий

200 руб.

Билирубин общий – это сумма промежуточных продуктов метаболизма гемоглобина, содержащихся в сыворотке крови: непрямого и прямого билирубина. 

Синонимы русские

Общий билирубин крови, общий билирубин сыворотки.

Синонимыанглийские

Total bilirubin, TBIL.

Метод исследования

Колориметрический фотометрический метод.

Единицы измерения

Мкмоль/л (микромоль на литр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную, капиллярную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  1. Не принимать пищу в течение 12 часов перед исследованием.
  2. Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 30 минут до исследования.
  3. Не курить за 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Данный тест предназначен для количественного определения содержания общего (прямого + непрямого) билирубина в сыворотке крови.

Билирубин – это продукт распада гемоглобина. Он имеет интенсивный желто-коричневый цвет. В связи с этим сам билирубин и продукты его метаболизма придают желчи, калу и моче соответствующую окраску.

Гемоглобин – основная часть эритроцитов (красных клеток крови). Его функция состоит в доставке кислорода в ткани из органов дыхания и обратном транспорте углекислого газа. Необходимость в расщеплении гемоглобина и удалении продуктов его распада возникает в связи с процессом постоянного обновления эритроцитов в крови.

Красные клетки крови имеют ограниченную продолжительность жизни, которая составляет в среднем 90-150 дней. Эритроциты со сниженной жизнеспособностью распознаются клетками ретикулоэндотелиальной системы, поглощаются ими и распадаются на ферменты.

Ретикулоэндотелиальная система представляет собой особые ткани, находящиеся в различных отделах организма и выполняющих иммунную функцию. Органами их особой концентрации являются селезенка, лимфатические узлы и костный мозг.

В результате расщепления гемоглобина образуется непрямой (несвязанный) билирубин, который затем выделяется в циркулирующую кровь. За сутки у человека распадается около 1  % циркулирующих эритроцитов с образованием 100-250 мг билирубина.

Следующий этап трансформации билирубина происходит в печени. Клетки печени “захватывают” его из крови, связывают с другим метаболическим компонентом (глюкуроновой кислотой) и превращают в прямой, или связанный, билирубин.

Присоединенная глюкуроновая кислота придает билирубину свойство растворяться в жидкости, что и позволяет ему растворяться в желчи, после чего в ее составе он сначала выводится в кишечник, а затем удаляется оттуда вместе с калом.

В крови должно находиться только небольшое количество непрямого билирубина, что соответствует нормальному процессу транспортировки этого вещества из мест его образования (ретикуло-эндотелиальной системы) в печень.

Однако на некоторых этапах метаболизма билирубина могут происходить нарушения обмена, при которых его концентрация в сыворотке увеличивается. Это называется гипербилирубинемией (превышение уровня билирубина в крови).

Если билирубина в крови слишком много, он может проникнуть из кровяного русла в окружающие ткани, что приведет к симптомам желтухи: желтому оттенку кожи, склер и видимых слизистых оболочек.

Выделяют три основных типа нарушений обмена билирубина в организме, приводящих к его накоплению в крови.

  1. Усиление гемолиза эритроцитов. Это происходит при заболеваниях, когда разрушаются относительно молодые красные клетки крови, причем доля эритроцитов, подвергающихся гемолизу, возрастает. К таким отклонениям относятся некоторые заболевания крови, при которых происходит образование не вполне жизнеспособных эритроцитов (серповидно-клеточная анемия, сфероцитоз, сидеробластная анемия, пернициозная анемия), иммунная агрессия в отношении нормальных эритроцитов (гемолитическая болезнь новорождённых) и др. Кроме того, гемолиз эритроцитов может усиливаться в результате токсического действия на клетки крови некоторых химических веществ. Повышенный распад эритроцитов, в свою очередь, приводит к необходимости ферментативного расщепления большего количества гемоглобина в клетках ретикулоэндотелиальной системы. При этом образуется дополнительный объем непрямого билирубина, который впоследствии выделяется в кровоток. В итоге уровень билирубина повышен.
  2. Нарушение функциональной и/или анатомической целостности печеночных клеток. К нему приводят заболевания, при которых поражаются клетки печени, наиболее распространены вирусные гепатиты. Кроме того, это может происходить при острых и хронических воздействиях токсических веществ: алкоголя, лекарственных средств, химикатов, применяемых в быту и промышленном производстве. Такие нарушения влекут за собой повышение проницаемости внешней оболочки печеночных клеток или полное ее разрушение. В результате содержимое печеночных клеток выходит в системный кровоток. Так как они всегда содержат большое количество билирубина, он тоже попадает в циркулирующую кровь, что приводит к гипербилирубинемии.
  3. Препятствие для свободного прохождения желчи по желчевыводящим путям до ее попадания в кишечник. Это происходит из-за того, что желчные пути сдавливаются при деформации тканей, которые находятся в непосредственной близости к ним (опухоли, увеличенные лимфоузлы, рубцовые изменения), или из-за замедления двигательной активности желчных путей (дискинезия). Такие нарушения могут приводить к повышению давления желчи внутри желчных капилляров, их перерастяжению (вплоть до микроразрывов) и чрезмерной проницаемости стенок желчевыводящих путей, что сопровождается проникновением компонентов желчи в кровь и приводит к повышению уровня билирубина.

Кроме того, существует еще несколько других, не основных, причин повышенного содержания билирубина – это довольно редкие заболевания различного происхождения, но их клиническое значение невелико.

Таким образом, анализ на общий билирубин в сыворотке крови позволяет диагностировать различные заболевания, прямо или косвенно связанные с нарушением процессов кроветворения, функции печени и желчевыводящих путей.

Для чего используется исследование?

  • Для диагностики различных заболеваний крови, при которых происходит усиленное разрушение эритроцитов: серповидно-клеточной анемии, сфероцитоза, сидеробластной/пернициозной анемии.
  • Чтобы оценить состояние печени (целостность ее клеточных элементов).
  • Чтобы выявить гепатит и степень его тяжести.
  • Чтобы убедиться в нормальной проходимости желчных путей.
  • Для диагностики физиологической и гемолитической желтухи новорождённых.
  • Для диагностики некоторых заболеваний поджелудочной железы, а также других органов и тканей, связанных с желчевыводящими путями.
  • Чтобы оценить тяжесть состояния больного при отравлении веществами, которые вызывают гемолиз эритроцитов.

Когда назначается исследование?

  • При симптомах заболеваний крови.
  • Когда необходимо оценить функциональное состояние печени.
  • При желтухе, в частности у новорождённых.
  • При диагностике заболеваний печени.
  • При оценке функции желчных путей.
  • При подозрении на вирусный гепатит.
  • Когда проводится клиническое наблюдение за пациентом с заболеванием печени.
  • При симптомах закупорки желчных путей.
  • При наблюдении за состоянием пациента, отравившегося определенными химическими веществами.

Что означают результаты?

Референсные значения (норма билирубина у новорождённых и пациентов других возрастных групп):

ВозрастРеференсные значения
Меньше 1 дня24 – 149 мкмоль/л
1-3 дня58 – 197 мкмоль/л
3-6 дней26 – 205 мкмоль/л
Больше 6 дней0 – 21 мкмоль/л

Повышение билирубина в крови обычно указывает на преждевременное разрушение эритроцитов, повреждение печеночных клеток или нарушение оттока желчи по желчевыводящим путям. Понижение уровня билирубина не имеет существенного диагностического значения.

Причины повышения уровня общего билирубина в сыворотке:

  • серповидно-клеточная анемия,
  • сфероцитоз,
  • сидеробластная/пернициозная анемия,
  • физиологическая/гемолитическая желтуха новорождённых,
  • отравление некоторыми токсическими веществами,
  • воспаление желчного пузыря и желчевыводящих путей,
  • желчнокаменная болезнь,
  • опухоли желчного пузыря,
  • вирусный/алкогольный/токсический гепатит,
  • цирроз печени,
  • метастазы опухоли в печень,
  • некоторые редкие заболевания крови и нарушения обмена веществ.

Также рекомендуется

Кто назначает исследование?

Врач общей практики, терапевт, инфекционист, гастроэнтеролог, педиатр, неонатолог, хирург, гематолог.

Литература

  1. Blood Biochemistry. N J Russell, G M Powell, J G Jones, P J, Winterburn and J M Basford, Croom Helm, Лондон и Канберра, 1982 г.
  2. Blood Chemistry and CBC analysis-Clinical Laboratory Testing from a Functional Perspective. Rychard Weatherby N.D и Scott Fergusson, N.D., Bear Mounting Publishing, 2002 г.
  3. Tietz Clinical Guide to Laboratory Tests. Alan H. B. Wu, Saunders/Elsevier, 2006 г.
  4. Laboratory and Diagnostic Tests. Joyce LeFever Kee – Pearson, Prentice Hall, 8-е издание 2010 г.
  5. District Laboratory Practice in Tropical Countries. Monica Cheesbrough, Cambridge University Press, второе издание, 2005 г.
  6. Clinical Chemistry. A Laboratory Perspective . Wendy L. Arneson, Jean M. Brickell, F.A.Davis Company, 2007 г.
  7. Clinical Chemistry. Michael L. Bishop, Edward P. Fody, Larry E. Schoef, Lippincott Williams & Wilkins, 2005 г.

Источник: https://helix.ru/kb/item/06-036

Методы определения билирубина и его метаболитов

Определение прямого билирубина в сыворотке крови

Определение билирубина в сыворотке крови

В клинической практике используются различные методы определения билирубина и его фракций в сыворотке крови.

Наиболее распространенным из них является биохимический метод Ендрассика-Грофа. Он основан на взаимодействии билирубина с диазотированной сульфаниловой кислотой с образованием азопигментов.

При этом связанный конъюгированный билирубин (билирубин-глюкуронид) дает быструю («прямую») реакцию с диазореактивом,тогда как реакция непрямого свободного (не связанного с глюкуронидом) билирубина протекает значтельно медленнее.

Для ее ускорения применяют различные вещества–акселераторы, например кофеин (метод Ендрассика-Клеггорна-Грофа), которые освобождают билирубин из белковых комплексов («непрямая» реакция).

В результате взаимодействия с диазотированной сульфаниловой кислотой билирубин образует окрашенные соединения. Измерения проводят на фотометре.

Нормальная концентрация в крови:

общий билирубин — 8,5-20,5 мкМ/л, связанный (прямой) билирубин — 0,9-4,3 мкМ/л, свободный (непрямой) билирубин — 6,4-17,1 мкМ/л,

в моче у здоровых людей не определяется,

Уробилиноген в моче — 0,08-4,23 мкМ/сутки,
Стеркобилиноген в кале – 50-300 мл/сутки.

Рефферентные значения нормальных показателей общего, непрямого и прямого билирубина для взрослых, и детей приведены в таблице:

У взрослых и детей старше 1 месяца У детей до 1 месяца
Общий 8,5 — 20,5 мкмоль/л При рождении 51-60 мкмоль/л, со 2 дня и до конца первой недели может нарастать до 256 мкмоль/л за счёт непрямого (у недоношенных до 170 мкмоль/л). К концу 3 недели приближается к показателю для взрослых
Непрямой До 15,4 мкмоль/л (75% от общего) В пиковый период Не менее 90 % от общего
Прямой До 5,1 мкмоль/л (25% от общего) В пиковый период Не более 10 % от обшего

Таблица 2. Дифференциально-диагностические критерии желтух

Показатели Тип желтухи
Механическая Паренхиматозная Гемолитическая
Анамнез ЖКБ в анамнезе, операции на жёлчных путях, снижение массы тела Контакт с больными желтухой, инфекционные забол,токсические воздействия Появление желтухи в детском возрасте, подобные заболевания у родственников
Окраска Жёлтая с зеленоватым оттенком (verdinicterus) Жёлтая с оранжево- красным оттенком (rubinicterus) Лимонно-жёлтая (flavinicterus)
Интенсивность желтухи От умеренной до резко выраженной, интермитти- рующий характер Умеренно выражена Умеренно выражена
Кожный зуд Выражен Отсутствует Отсутствует
Боли в правом подреберье Частые, носят интенсивный характер Редкие, выражены слабо Отсутствуют
Тяжесть в области печени Не характерна Часто в начальный период болезни Отсутствует
Размеры печени Не изменены Увеличены Не изменены
Размеры селезёнки Не изменены Увеличены Не изменены
Цвет мочи Тёмный Тёмный Не изменён
Цвет кала Обесцвечен Обесцвечен Не изменён или тёмный
Уробилин в моче Отсутствует (при полной обтурации) Отсутствует в начальный период болезни, затем может быть повышен Резко повышен
Билирубин сыворотки крови Повышен за счёт прямой фракции Повышен за счёт обеих фракций Повышен за счёт непрямой фракции
Щелочная фосфатаза сыворотки крови Повышенный уровень Уровень не изменён Уровень не изменён
АЛТ, ACT сыворотки крови Незначительно повышены при длительных сроках желтухи Повышенный уровень Уровень не изменён

Минеральный обмен

Общие понятия. Функции минеральных веществ

Промежуточный и конечный обмен минеральных веществ

Характеристика отдельных элементов

Обмен воды и электролитов

Минеральный обмен – совокупность процессов всасывания, распределения, усвоения и выделения минеральных веществ, находящихся в организме преимущественно в виде неорганических соединений.

Всего в организме обнаруживается свыше 70 элементов таблицы Д.И. Менделеева, 47 из них присутствуют постоянно и называются биогенными. Минеральные вещества играют важную роль в поддержании кислотно-основного равновесия, осмотического давления, системе свертывания крови, регуляции многочисленных ферментных систем и пр., т.е. имеют решающее значение в создании и поддержании гомеостаза.

По количественному содержанию в организме они делятся на макроэлементы, если их больше чем 0,01 % от массы тела (К, Са, Мg, Na, P, Cl) и микроэлементы (Mn, Zn, Cr, Cu, Fe, Co, Al, Se).

Основную часть минеральных веществ организма составляют хлористые, фосфорнокислые и углекислые соли натрия, кальция, калия, магния.

Соли в жидкостях организма находятся в частично или полностью диссоциированном виде, поэтому минеральные вещества присутствуют в виде ионов – катионов и анионов.

В результате биохимического исследования крови можно установить содержание магния (0,8-1,2ммоль/л), железа (9,0-31,3 мкмоль/л), натрия (135-145 ммоль/л), калия (3,5-5,0 ммоль/л), кальция (2,23-2,57 ммоль/л), фосфора (0,8-1,45 ммоль/л), хлора (95-105 ммоль/л).

Функции минеральных веществ:

1) пластическая (кальций, фосфор, магний);

2) поддержание осмотического давления (калий, натрий, хлор);

3) поддержание буферности биологических жидкостей (фосфор, калий, натрий);

4) поддержание коллоидных свойств тканей (все элементы);

5) детоксикационная (железо в составе цитохрома Р-450, сера в составе глутатиона);

6) проведение нервного импульса (натрий, калий);

7) участие в ферментативном катализе в качестве кофактора или ингибитора;

8) участие в гормональной регуляции (йод, цинк и кобальт входят в состав гормонов).

Предыдущая20212223242526272829303132333435Следующая

Дата добавления: 2016-01-03; просмотров: 2169; ЗАКАЗАТЬ НАПИСАНИЕ РАБОТЫ

ПОСМОТРЕТЬ ЁЩЕ:

Источник: https://helpiks.org/6-38303.html

ЛечениеСосудов
Добавить комментарий