Способы получения плазмы и сыворотки крови гематокрит

Способы получения плазмы и сыворотки крови гематокрит

Способы получения плазмы и сыворотки крови гематокрит

Гематокримт— часть объёма крови, приходящаяся на эритроциты.

Иногда гематокрит определяется как отношение суммарного объёма всех форменных элементов (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты) к общему объёму крови; разница, однако, невелика, поскольку 99 % общего объёма форменных элементов приходится именно на эритроциты.

Гематокрит (Ht) выражают в процентах к общему объёму крови (тогда он обозначается в %), или в литрах на литр (л/л) — тогда он обозначается десятичной дробью (с точностью до сотых), соответствующей доле форменных элементов в 1 литре крови (450 мл клеток в 1 литре крови = 0,45 л/л = 45 %).

Определение гематокрита проводится с помощью специальной стеклянной градуированной трубочки — гематокрита, которую заполняют кровью и центрифугируют, после чего отмечают, какую часть трубочки занимают форменные элементы крови. Всё шире распространяется также использование автоматических анализаторов.

Сымворотка кромви — плазма крови, лишённая фибриногена. Сыворотки получают либо путём естественного свёртывания плазмы (нативные сыворотки), либо осаждением фибриногена ионами кальция. В сыворотках сохранена большая часть антител, а за счёт отсутствия фибриногена резко увеличивается стабильность.

Сыворотку выделяют при анализе крови на инфекционные заболевания, при оценке эффективности вакцинации (титр антител), а также при биохимическом анализе крови.

Получение крови.Небольшие количества крови у животных в основном берут из ушной раковины, для этого место взятия предварительно обрабатывают, выстригают или выбривают. Протирают тампоном смоченным спиртом 70%, после этого либо делают надрез сосуда, либо прокалывают вену иглой.

Первую выступившую каплю снимают тампоном так как после обработки спиртом эритроциты в ней разрушаются. Затем по каплям кровь собирают в часовое стекло и сразу же набирают в пипетки для исследования. У человека берут кровь из среднего или безымянного пальца левой руки, предварительно протерев 70% спиртом.

Большое количество крови у лошади, у КРС, у МРС берут кровь из ярёмной вены на границе верхней и средней трети шеи.

Для этого на шее животного ниже места прокола накладывают жгут, чтобы вена наполнилась кровью, протирают её спиртом или настойкой йода, затем в вену под углом 45 градусов вводят стерильную острую иглу против тока крови по направлению к голове. Кровь собирают в пробирки или колбы. У свиней большие количества крови получают из хвоста.

Для этого скальпелем отсекают около 1 см хвоста, собирают кровь в пробирки, затем кончик хвоста сдавливают резинкой или бинтом на 1-2 суток, рану тщательно дезинфицируют. У собаки большие количества крови получают из вены сафена (наружная поверхность бедра). У кроликов из ушной вены, у морских свинок из сердца, у кур из гребня или подкрановой вены.

Получение сыворотки крови.

Для получения сыворотки крови она должна свернуться, для этого кровь собирают в чистые сухие пробирки, струю крови направляют по стенке пробирки, чтобы не образовалась пена, затем пробирки с кровью ставят в термостат на несколько часов для полного свёртывания, затем образовавшийся сгусток отделяют от стенок пробирки стеклянной палочкой: обводя вокруг сгустки, затем кровь отстаивают или центрифугируют, при этом сгусток уплотняется-ретракцияи из него выделяется сыворотка соломенно-жёлтого цвета.

Получение плазмы крови.Кровь нужно предохранить от свёртывания, то есть стабилизировать. Для стабилизации крови используют антикоагулянты. К ним относится лимоннокислый Na, щавелевокислый Na, гепарин. В пробирку помещают антикоагулянт, затем берут кровь.

После взятия пробирку несколько раз аккуратно переворачивают для перемешивания. При отстаивании или центрифугировании, кровь разделяют на 2 слоя: Сверху желтоватая мутная жидкость-плазма, внизу тёмно-вишнёвого цвета слой эритроцитов, а на нём небольшой белый налёт лейкоцитов.

Сыворотка крови отличается от плазмы тем, что в ней отсутствует белок фибриноген, так как из него образуется не растворённый фибрин, который стал основой для тромба.

Для того чтобы из плазмы получить сыворотку, нужно из неё осадить белок фибриноген. Затем от центрифугировать и отстаивать в отдельную пробирку сыворотку. ТХУ-трихлоруксусная кислота.

Определение объёма соотношения между плазмой и форменными элементами крови-это показатель гематокрита.

В крови содержится 55-60 % плазмы 40-45 форменных элементов. Для определения показателя гематокрита используют стабилизированную кровь (с добавлением антикоагулянта). Немного стабилизированной крови помещают на часовое стекло. Берут 2 капиллярные пробирки. Оба капилляра заполняют кровью.

Затем оба конца капилляра затыкают пластилином, затем помещают в специальную центрифугу и центрифугируется при режиме 3-4 тысяч оборотов в минуту 8-10 минут. Извлекают капилляры. Кровь в них разделяется на 2 слоя. От центра плазма, от периферии форменные элементы. Затем капилляры помещают в специальную рамку.

Определяют количества плазмы в обоих капиллярах и берут среднюю величину.

Форменные элементы крови.

1. Эритроциты. Красные кровяные тельца у высших животных округлые, безъядерные, диаметром 5-6 макромеров, сверху покрыты белково-серозной оболочкой, внутри строма-она представлена гемоглобином.

Гемоглобин-пигмент, который по структуре является сложным белком, состоящим из простого белка глобина и красящего вещества гема, который является простетической частью. Гемоглобин состоит из 4 перойдных колец в центре которых двухвалентное железо.

На разрезе эритроцит имеет двояковогнутый диск для увеличения площади поверхности.

2. Лейкоциты-белые кровяные тельца, крупнее эритроцитов, содержит ядро, способны к самостоятельному передвижению как в кровеносном русле, так и за его пределами.

По строению и воспроизведению окраски их делят на 2 группы: зернистые (гранулоциты) и не зернистые (агранулоциты). К зернистым относят базофилы, эозинофилы, нейтрофилы.

Нейтрофилы по степени зрелости делят на юные, палочкоядерные и сегментоядерные.

Агранулоциты-лимфоциты (малые, средние, большие). Моноциты. У всех животных и человека преобладают сегментоядерные нейтрофилы и лимфоциты с разными вариациями.

Источник: https://lechimsosudy.com/sposoby-poluchenija-plazmy-i-syvorotki-krovi/

Взятие, условия хранения и доставки венозной крови для проведения ИФА и ПЦР

Способы получения плазмы и сыворотки крови гематокрит

Подготовка обследуемых

Взятие венозной крови производится натощак, в утренние часы.

При взятии венозной крови необходимо учитывать ряд факторов которые могут повлиять на результат гематологических исследований: физическое перенапряжение (бег, быстрая ходьба, подъем по лестнице), эмоциональное возбуждение, прием пищи накануне исследования, купение, прием алкоголя и т.д.

Для исключения этих факторов, следует соблюдать следующие условия подготовки пациентов: •    взятие венозной крови осуществляется после 15-минутного отдыха обследуемого; •    пациент во время взятия сидит, у тяжелых больных взятие крови может осуществляться лежа.

•    курение, прием алкоголя и пищи непосредственно перед исследованием исключаются;   Основной способ взятия венозной крови для лабораторного исследования – пунктирование вены. Венозную кровь, как правило, забирают из локтевой вены.

В случае необходимости ее можно получить из любой вены (запястья, тыла ладони, над большим пальцем и т.д.). У новорожденных и грудных детей кровь обычно берется из лобной, височной или яремной вены.

При взятии крови из вены необходимо избегать: мест шрамов, гематом; вен, используемых для переливания растворов; ножных вен (у больных диабетом, при нарушениях периферического кровотока, ангиопатиях).

Оборудование

Для венепункции можно использовать три варианта пункционных систем: •    одноразовые пластиковые системы (вакутейнеры), состоящие из контейнера с навинчивающейся на него одноразовой иглой и пробирки с плотно прилегающей пробкой и вакуумом внутри; •    одноразовые шприцы с подходящим диаметром иглы; •    иглы с внутренним диаметром 0,55-0,65 мм.  

Условия транспортировки венозной крови

Правильно собранная венозная кровь должна быть своевременно доставлена в лабораторию. При комнатной температуре время доставки не должно превышать 60 мин после взятия крови.

Если доставка крови в лабораторию осуществляется в течении дня, то она хранится при температуре +40С-+60С (в холодильнике) и далее в специальных транспортных контейнерах в ледяной бане доставляется в лабораторию.

Во время транспортировки пробирки и контейнеры с кровью должны быть соответствующим образом защищены от вредного воздействия окружающей среды и погодных условий. При транспортировке венозной крови должны строго соблюдаться правила техники безопасности, асептики и антисептики.

Пробирки должны быть промаркированы, упакованы и плотно закрыты. Упаковка должна быть удобной для транспортировки. Сроки хранения зависят от исследуемого показателя, температуры хранения и антикоагулянта, с помощью которого осуществляется взятие крови.

Методика получения сыворотки крови (без использования разделительных или вспомогательных средств для центрифугирования)

Оборудование 1.    Центрифужные стеклянные пробирки общим объемом 10-12 мл. 2.    Стеклянные палочки или Пастеровские пипетки с запаянными на конце капиллярами (для отделения сгустка). 3.    Центрифуга лабораторная (до 3000 об/мин).  

Приготовление сыворотки

Венозная кровь, полученная без антикоагулянтов в центрифужную стеклянную пробирку, отстаивается в ней при комнатной температуре (15-200С) в течение 30 минут до полного образования сгустка.

По окончании образования сгустка пробирки открывают и осторожно проводят тонкой стеклянной палочкой или запаянным капилляром Пастеровской пипетки по внутренним стенкам пробирки по окружности в верхнем слое крови для отделения столбика сгустка от стенок пробирки.

Сыворотку сливают в другую центрифужную пробирку, придерживая сгусток стеклянной палочкой, и центрифугируют, либо центрифугируют в тех же, первичных, пробирках.

Центрифугирование

После ретракции сгустка пробы центрифугируют при относительной центробежной силе RCF от 1000 до 1200 xg (максимально до 1500 xg) в течение 10 минут. В случае использования микропробирок и центрифуги для них центрифугирование проводят при 6000-15000 xg в течение 1,5 минут. После центрифугирования сыворотку сливают во вторичные (транспортные) пробирки.

Сыворотка не должна быть гемолизированной. Плазма получается из крови путем отделения клеток крови. Она представляет собой бесклеточную надосадочную жидкость, которая получается при центрифугировании крови, свертываемость которой ингибирована добавлением антикоагулянтов тотчас после взятия. В плазме содержатся факторы свертывания крови.

В связи с тем, что плазма и сыворотка содержат около 93% воды, в отличие от цельной крови, которая содержит около 81% воды, концентрация компонентов в плазме на 12% выше, чем в цельной крови. Это может иметь принципиальное диагностическое значение при исследовании активности, например ЛДГ у которого наиболее высокая концентрация наблюдается в сыворотке крови, чем в плазме.

Широко применяются коммерческие системы для получения плазмы. Они представляют собой пробирки или устройства типа шприцев (“вакутейнер”) с вакуумом внутри, содержащие различные антикоагулянты и/или ингибиторы гликолиза.

Как и в случае устройств для сыворотки, эти пробирки для плазмы имеют разные варианты, содержащие разделительные гели и гранулят из полистирола, ускоряющие получение плазмы, облегчающие транспортировку и хранение. В них уже имеются антикоагулянты и метки до которых следует набирать кровь.

Методика получения плазмы

Приготовление плазмы

Венозную кровь, полученную с антикоагулянтом немедленно после взятия перемешивают переворачиванием пробирок с кровью, закрытых крышками, не менее 5 раз. Перемешивание должно осуществляться без встряхивания и пенообразования. Время между началом наложения жгута и смешиванием крови с антикоагулянтом не должно превышать 2 минут.

После уравновешивания пробирок с кровью, их центрифугируют при RCF 1000-1200 xg, но не более 1500 xg, в течение 10-15 минут. Плазму немедленно сливают в транспортную центрифужную или химическую пробирку. Пробирку закрывают крышкой. Условия транспортировки плазмы крови Правильно полученная и собранная плазма крови должна быть своевременно доставлена в лабораторию.

При комнатной температуре время доставки не должно превышать 24 часа. Если доставка плазмы в лабораторию осуществляется в течение дня, то она хранится при температуре +4…+80С (в холодильнике) и далее в специальных транспортных контейнерах в ледяной бане доставляется в лабораторию. Для более длительного хранения плазма может быть заморожена при температуре –200С.

Правила транспортировки плазмы такие же как и венозной крови.

Источник: https://analyz24.ru/poleznaya-informatsiya/nauchno-populyarnye-stati/nauchno-populyarnye-stati_117.html

Техника получения крови, сыворотки и плазмы

Способы получения плазмы и сыворотки крови гематокрит

Получение крови.Небольшие количества крови у животных в основном берут из ушной раковины, для этого место взятия предварительно обрабатывают, выстригают или выбривают. Протирают тампоном смоченным спиртом 70%, после этого либо делают надрез сосуда, либо прокалывают вену иглой.

Первую выступившую каплю снимают тампоном так как после обработки спиртом эритроциты в ней разрушаются. Затем по каплям кровь собирают в часовое стекло и сразу же набирают в пипетки для исследования. У человека берут кровь из среднего или безымянного пальца левой руки, предварительно протерев 70% спиртом.

Большое количество крови у лошади, у КРС, у МРС берут кровь из ярёмной вены на границе верхней и средней трети шеи.

Для этого на шее животного ниже места прокола накладывают жгут, чтобы вена наполнилась кровью, протирают её спиртом или настойкой йода, затем в вену под углом 45 градусов вводят стерильную острую иглу против тока крови по направлению к голове. Кровь собирают в пробирки или колбы. У свиней большие количества крови получают из хвоста.

Для этого скальпелем отсекают около 1 см хвоста, собирают кровь в пробирки, затем кончик хвоста сдавливают резинкой или бинтом на 1-2 суток, рану тщательно дезинфицируют. У собаки большие количества крови получают из вены сафена (наружная поверхность бедра). У кроликов из ушной вены, у морских свинок из сердца, у кур из гребня или подкрановой вены.

Получение сыворотки крови.

Для получения сыворотки крови она должна свернуться, для этого кровь собирают в чистые сухие пробирки, струю крови направляют по стенке пробирки, чтобы не образовалась пена, затем пробирки с кровью ставят в термостат на несколько часов для полного свёртывания, затем образовавшийся сгусток отделяют от стенок пробирки стеклянной палочкой: обводя вокруг сгустки, затем кровь отстаивают или центрифугируют, при этом сгусток уплотняется-ретракцияи из него выделяется сыворотка соломенно-жёлтого цвета.

Получение плазмы крови.Кровь нужно предохранить от свёртывания, то есть стабилизировать. Для стабилизации крови используют антикоагулянты. К ним относится лимоннокислый Na, щавелевокислый Na, гепарин. В пробирку помещают антикоагулянт, затем берут кровь.

После взятия пробирку несколько раз аккуратно переворачивают для перемешивания. При отстаивании или центрифугировании, кровь разделяют на 2 слоя: Сверху желтоватая мутная жидкость-плазма, внизу тёмно-вишнёвого цвета слой эритроцитов, а на нём небольшой белый налёт лейкоцитов.

Сыворотка крови отличается от плазмы тем, что в ней отсутствует белок фибриноген, так как из него образуется не растворённый фибрин, который стал основой для тромба.

Для того чтобы из плазмы получить сыворотку, нужно из неё осадить белок фибриноген. Затем от центрифугировать и отстаивать в отдельную пробирку сыворотку. ТХУ-трихлоруксусная кислота.

Определение объёма соотношения между плазмой и форменными элементами крови-это показатель гематокрита.

В крови содержится 55-60 % плазмы 40-45 форменных элементов. Для определения показателя гематокрита используют стабилизированную кровь (с добавлением антикоагулянта). Немного стабилизированной крови помещают на часовое стекло. Берут 2 капиллярные пробирки. Оба капилляра заполняют кровью.

Затем оба конца капилляра затыкают пластилином, затем помещают в специальную центрифугу и центрифугируется при режиме 3-4 тысяч оборотов в минуту 8-10 минут. Извлекают капилляры. Кровь в них разделяется на 2 слоя. От центра плазма, от периферии форменные элементы. Затем капилляры помещают в специальную рамку.

Определяют количества плазмы в обоих капиллярах и берут среднюю величину.

Форменные элементы крови.

1. Эритроциты. Красные кровяные тельца у высших животных округлые, безъядерные, диаметром 5-6 макромеров, сверху покрыты белково-серозной оболочкой, внутри строма-она представлена гемоглобином.

Гемоглобин-пигмент, который по структуре является сложным белком, состоящим из простого белка глобина и красящего вещества гема, который является простетической частью. Гемоглобин состоит из 4 перойдных колец в центре которых двухвалентное железо.

На разрезе эритроцит имеет двояковогнутый диск для увеличения площади поверхности.

2. Лейкоциты-белые кровяные тельца, крупнее эритроцитов, содержит ядро, способны к самостоятельному передвижению как в кровеносном русле, так и за его пределами.

По строению и воспроизведению окраски их делят на 2 группы: зернистые (гранулоциты) и не зернистые (агранулоциты). К зернистым относят базофилы, эозинофилы, нейтрофилы.

Нейтрофилы по степени зрелости делят на юные, палочкоядерные и сегментоядерные.

Агранулоциты-лимфоциты (малые, средние, большие). Моноциты. У всех животных и человека преобладают сегментоядерные нейтрофилы и лимфоциты с разными вариациями.

Гемоглобин-сложный белок, который находится внутри эритроцитов и составляет его строму.

Гемоглобин за счёт двухвалентного железа в составе гема может присоединять кислород-оксигемоглобин, это не прочное соединение, оно образуется в сосудах лёгких, отдаёт кислород в тканевую жидкость и восстанавливается.

Соединение гемоглобина с углекислым газом-карбгемоглобин, оно образуется в тканях, транспортируется в лёгких. Карбгемоглобин легко отдаёт углекислый газ и присоединяет кислород.

Cito! – Быстро. Тройчатка экспресс анализа крови-это уровень гемоглобина, количество лейкоцитов в крови и скорость оседание эритроцитов. Для того чтобы определить уровень гемоглобина нужно разрушить эритроциты и выделить гемоглобин в раствор.

Физиологические соединения гемоглобина — это оксигемоглобин, карбгемоглобин, восстановленный. Патологических видов гемоглобина более 50-ти. Из них карбоксигемоглобин соединение гемоглобина с угарным газом, очень прочное соединение, метгемоглобин соединение, в котором железо меняет свою валентность и становится трёхвалентным и это также приводит к образованию очень прочных соединений.

СОЭ (скорость оседания эритроцитов).

Если взять кровь, стабилизированную лимоннокислым натрием и набрать её в капилляр, поставить капилляр вертикально, эритроциты начнут оседать, сверху будет оставаться плазма. Скорость оседания эритроцитов может быть различной. Это зависит от нескольких факторов, от вида животного. Самая высокая скорость оседания эритроцитов у лошади и составляет 64 мм\ч.

У КРС и МРС, кроликов 0.5-1 мм\ч, собака 2.5 мм\ч, у свиньи 34 мм\ч, у человека 4-8 мм\ч. Кроме того у каждого индивидуума в течении жизни СОЭ может меняться. В физиологических условиях, то есть в норме СОЭ меняется не значительно, однако у женской особи во 2-ой половине беременности СОЭ значительно увеличивается.

Чаще всего СОЭ ускоряется или замедляется при патологиях.

Например, СОЭ замедляется при сгущении крови, ускоряется при наличии в организме воспалительных процессов при которых образуются много защитных белков глобулинов, они адсорбируются на эритроцитах, понижая их поверхностный заряд и в столбике крови эритроциты будут оседать быстрее. СОЭ важный диагностический показатель и входит в тройчатку экспресс анализа крови.

Гемолиз эритроцитов.Это разрушение оболочки эритроцитов и выход гемоглобина в раствор. Различают несколько видов гемолиза:

1. Осмотический.

2. Химический.

3. Температурный.

4. Механический.

Осмотический гемолиз основан на том, что в гипотонических растворах эритроциты разрушаются в зависимости от их концентрации, причём эритроциты разных индивидуумов по-разному разрушаются в гипотонических растворах-это значит, что эритроциты обладают осмотической резистентностью-это способность эритроцитов противостоять пониженному осмотическому давлению.

Химический основан на разрушении эритроцитов под действием химических веществ (аммиак, дистиллированная вода, кислоты).

Температурный основан на разрушении эритроцитов после размораживания, предварительно замороженных эритроцитов. Механический при перемешивании.

Свёртывание крови.

Свёртывание крови — это защитная реакция организма, которая предохраняет его от кровопотерь. Свёртывание крови запускается при нарушении целостности сосудистой стенки, при механических или других повреждениях, или при появлении на сосудистой стенке шероховатостей. В крови есть вещества 3 категорий, которые участвуют в свёртывании крови:

1. Вещества, способствующие свёртыванию. Они объединяются в свёртывающуюся систему крови.

2. Вещества, препятствующие свёртыванию крови. Они объединились в противсвёртывающую систему.

3. Система веществ, обуславливающих разжижение уже свернувшейся крови-это фибринолитическая система.

Свёртывание крови складывается из взаимодействия их компонентов:

1. Гемостаз-остановка кровотока.

2. Рефлекторное сужение повреждённых кровеносных сосудов вплоть до спазма.

3. Гуморальное сужение под действием гормонов и медиаторов адреналин, серотонин, норадреналин.

4. Агрегация (прилипание) тромбоцитов друг к другу и их повреждение.

Свёртывающая система крови.

Выделяют 13 факторов свёртывания:

I. Фибриноген-белок плазмы крови, который попадая в необычную среду превращается в нерастворимую фазу-фибрин.

II. Протромбин-неактивная форма фермента, который при определённых условиях превращается в активный тромбин.

III. Тромбопластин-фермент, выделяющийся из тромбоцитов и активирующий протромбин.

IV. Ионизированный кальций-участвует во всех фазах свёртывания, активирует все ферменты.

V. Акцелерин (Ас)- фермент, ускоряющий активацию тромбопластина.

VI.

VII. Проконвертин- сходен с 5 фактором, участвует в образовании тромбопластина.

VIII. Антигемофильный глобулин А. Участвуют в образовании

IX. Антигемофильный глобулин В. Тромбопластина.

X. Тромботропин плазмы – участвует в образовании тромба.

XI. Протромбопластин плазмы.

XII. Фактор Хагемана. Он активирует протромбопластин.

XIII. Фибринстабилизирующий фактор (ФСФ).

Свёртывание крови проходит в 3 фазы и представляет собой цепь ферментативных реакций. Результат каждой ферментативной реакции становится пусковым механизмом для следующей ферментативной реакции.

Цепи ферментативных реакций предшествует следующей реакции. Это рефлекторный спазм травмированного сосуда и образование «тромбоцитарного гвоздя». Его образование начинается с изменения заряда сосудистой стенки в месте повреждения. Возникает смена заряда.

Это приводит к тому, что форменные элементы начинают скучиваться около повреждённого участка. Особая роль принадлежит тромбоцитам. Они скучиваются, слипаются между собой (агрегация), что приводит к первичному гемостазу. Агрегация тромбоцитов приводит к их нарушению.

Из них выходят БАВ, которые запускают ферментативное свёртывание (коагуляционный гемостаз). В нём различают три фазы:

1. При разрушении тромбоцитов из них освобождается тромбопластин, который называется кровяной тромбопластин. Из повреждённой сосудистой стенки освобождается тканевой тромбопластин.

В норме они в организме отсутствуют и выделяются только при повреждении стенки. При их участии образуется фермент-кровяная и тканевая протромбиназа.

Это происходит под влиянием 5 8 9 10 и 11 факторов с участием ионов кальция.

2. Заключается в активации протромбина и превращению его в активный тромбин под влиянием 5 7 факторов и в присутствии ионов кальция.

3. Заключается в образовании фибрина. Идёт в 3 этапа:

a. Протеолитический этап. Тромбин действует на фибриноген, отщепляет от него отдельные мономеры, образуется профибрин.

b. Полимеризация. При участии кальция молекулы профибрина склеиваются. Образуется фибрин-полимер.

c. Под влиянием 8 фактора молекулы фибрин-полимера цементируются. Образуется окончательный фибрин. Он выпадает в виде нитей, в них запутываются форменные элементы, образуется сгусток.

Это не окончательный этап, так как через некоторое время начинается укорочение нитей фибрина, которое вызывает уплотнение сгустка и отжатие от него жидкости-сыворотки.

Уплотнение сгустка ретракция-сложный биологический процесс, который приводит к плотному закрытию сосуда пробкой, края раны при этом сближаются. Фибриновая пробка со временем растворяется.

Этот процесс-фибринолиз осуществляется под действием фибринолитической системы.

Источник: https://cyberpedia.su/10x6472.html

Метод получения плазмы и сыворотки крови

Способы получения плазмы и сыворотки крови гематокрит

Метод получения плазмы и сыворотки крови.

ПОЛУЧЕНИЕ ПЛАЗМЫ: Кровь кролика собирают в стеклянный стаканчик с 3,8р-ом цитрата натрия (соотношение консерванта и крови 1:9) . Кровь разливают в центрифужные пробирки уравновешивая их. Центрифугируют при 1000 об/мин 20мин. Плазму переносят в пенициллиновые флаконы и используют для дальнейших исследований.

ПОЛУЧЕНИЕ СЫВОРОТКИ :Кровь кролика собирают в несколько центрифужных пробирок и перемешивают пастеровской пипеткой …Процедуру периодически повторяют. Ставят пробирки в холодильник на 1 час при температуре 4 градуса. уравновешивают пробирки и цетрифугируют 20мин при 1000 об/мин.

Сыворотку крови переносят в пенициллиновые флаконы.22:48:38

Методы подсчета эритроцитов с использованием счетной камеры Горяева.

Берут заполненный меланжер для эритроцитов , зажав его концы 3 и 1пальцами , в течение одной минуты встряхивают.

После тщательного перемешивания , выпустив предварительно наружу 1-2капли, наносят небольшую капельку на сетку камеры, предварительно путем притирания плотно закрытую покровным стеклышком . Излишки р-а при этом стекают в желобки. Заполнив камеры, ставят ее под микроскоп. Если фор.

эл-ты расположены равномерно, приступает к подсчету эритроцитов. Чтобы получить данные необходимо подсчитать число э. в пяти больших квадратах, расположенных в разных местах сетки, например: по диагонали.

Методы подсчета лейкоцитов с использованием камеры Горяева.

Берут заполненный меланжер для лейкоцитов, зажав его концы 3и 1 пальцами, в течение одной мин встряхивают его, после перемешивания ,выпустив предварительно наружу 1-2 капли крови наносят небольшую капельку на сетку камеры , предварительно путем притирания плотно закрытую покровным стеклышком .

Излишки р-а стекают в желобки. Для получения результатов подсчет произв в 25 больших квадратах, что составляет 400мал.квадратиков.Формула для вычисления кол-ва лейкоцитов в 1мл крови.

X=B*400*20 и это все разделить на 400, где x-искомое число лейкоцитов в 1мл крови, в число лейк в 20больших квадратах.

Определение кол-ва гемоглобина в крови методом Сали.

В среднюю пробирку наливают 0,1н р-р хлористо-водородной кислоты до метки. Пипеткой берут 20мм в кубе крови из пальца сразу выдувают кровь на дно пробирки, так, чтобы верхний слой к-ты оставался неокрашенным. Не вынимая пипетку споласкивают ее кислотой. После содержимое пробирки перемешивают ударяя пальцем по дну пробирки.

Затем ставят в штатив на 5-10 мин. За это время гемоглобин полностью превращается в солянокислый гематин. Затем в пробирку добавляем по каплям дистил. воду , перемешивая р-р стеклянной палочкой, до тех пор пока цвет р-а не будет одинаков цветом стандарта.

цифра , стоящая на уровне полученного р-а показывает содержание гемоглобина в испытуемой крови.

Определение кол-ва гемоглобина в крови, с помощью фотокалориметра.

Для опред. сод. гемоглобина кровь берут обычным способом из пальца и смешивают ее в пробирки с 4 мл р-а I. В эту пробирку добавляют 0,1 мл р-а III . Смесь перелив в кювету. Через 1-2 мин происходит гемолиз.

Гальванометр соед со стабилизатором, а его вкл в сеть. Отмечают положение стрелки гольванометра, которое показывают отн.сод. гемоглобина в крови в % .на основании полученных данных, рассчитывают абсол. сод.

гемоглобина в крови .

Определение гематокритного числа.

Кровь для анализа берут из пальца руки чел или проделывают работу с кровью кролика. Гематокритные капилляры промыв р-Ом цитрата натрия и заполн кровью. Цетрифугируют 30мин при3000 об/мин. При этом под действием центробежной силы фор. эл-ты смещаются к кроям капилляров. Ближе к оси центрифуги остается столбик плазмы.

Определение времени свертыв. крови.

Кровь для анализа берут из пальца руки чел. Набирают в капилляр 25-30 мл крови. Отмечают по секундомеру время. Держа капилляр двумя пальцами , покачивает его на 30-45 градусов в обе стороны. Свободное смещение крови показыв, что свертывание еще не наступило. Полное свертывание крови соответствует моменту полной остановки движения крови.

Определение цветового показателя крови.

Определив в крови содержание гемоглобина и кол-во э.высчитывают цветовой пок по формуле. ЦП= гемоглобин ,гр/л разделить на число э.в одном микролитре крови ( первые три цифры) это все * на 3. В одном мкл крови в норме сод.166* 10 в -6 гемоглобина .

Следов, содержание гемоглобина в одном эритроците = 33*10 в -12 гр или 33пг. ЦП это соотн между кол.гемоглобина в крови и числом эритроцитов . ЦП позволяет оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобина . При пат.

состояниях ЦП может быть больше 1 или меньше 1.

9) приготовление мазка крови.
Взяв предметное стекло прикасаются его поверхностью капли крови. Предметное стекло держит в левой руке, а правой рукой представл шлифовальное стекло узким краем к стеклу с кровью слева от капли под углом 45 градусов и продвигают его вправо до соприкосновения его с кровью.

Выжидают пока кровь расплывется по всему ребру шлифовального стекла и затем легким быстрым движением ведут его справа налево до тех пор пока не будет исчерпана вся капля . Капля крови должна быть небольшой.мазок должен помещаться на стекле, не доходя одного см до его края.

Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет

10) определение лейкоцитарной формулы.Процентное соотношение разл видов лейкоцитов , выявленных в мазке крови , опр-ся как лейкоцитарная формула. Общее кол-во в 1 л. крови: 4-9 умножить на 10 в девятой . Эозинофилы: 0,5-5. Базофилы: 0-1. Нейтрофилы: юные – 0-1; палочкаяд.-1-6; сегментояд.- 47-72. Моноциты 3-11.

Лимфоциты – 19-37

Определение СОЭ.

Капилляр промывают 5%р-ром цитрата натрия. Затем набирают 50мл. цитрат натрия и выдувают его на часовое стекло. В этот же капилляр двукратно набирают кровь из пальца чел.

Обе порции крови выпускают на часовое стекло, смешивая с имеющимся там цитратом натрия. Полученную смесь набирают в капилляр и ставят в штатив. Через час смотрим высоту в мм образовавшейся плазмы в капилляре.

Его величина и явл. мерой СОЭ . В норме СОЭ сост. от 4 до 10 мм/ч

12) метод определения группы крови с исп гемаглютин.сывороток.

Предметное стекло помещают на белую бумагу и наносят по капле станд.сыворотки I,II,III групп , сод.соотв.агглютинины . I-альфа и бетта; II-бетта и III-альфа. Переносим небольш.кол.крови в каплю сыворотки 1группы. Затем, такое же кол.крови переносят в сыворотку 2 группы. 3-юю каплю переносят в сыворотку 3-ей группы.

Каждый раз тщательно размешиваем кровь в капле сыворотки пока смесь не примет равномерно розового цвета. Реакция агглютинации наступает через 1-5 мин. При наличии агглютинации капля становится прозрачной , а эритроциты склеиваются . 1. Отсутствие агглютинации говорит об отсутствие агглютиногенов, что явл св-Ом эритроцитов 1 группы. 2.

Если агглют.произошла с сыв. первой и третьей групп, то э.исследуемой крови, содержат А-агглютиноген, следов эта кровь второй группы. 3. Если агглют.проищошла с сыв. первой и второй групп это говорит о наличии В-агглютиногена в эритроцитах-3 группа крови.

4. При наличии агглютинации сыв.

второй и третьей групп эритроциты содержат А и В агглютиногены-4 группа крови.

13. Методика определения резус-антигена D универсальным реагентом анти- D.

На дно пробирки вносят 1 каплю стандартного реагента антнрезус;

добавляют каплю исследуемой крови (или эритроцитов);

содержимое пробирки перемешивают встряхиванием;

медленно поворачивают пробирку, наклоняя ее почти до горизонтали таким образом, чтобы содержимое растекалось по стенкам.

Такое распределение крови по стенкам пробирки делает реакцию более выраженной; агглютинация наступает в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса антиген-антитело и четко выраженной агглютинации, а также ввиду возможности замедленной реакции при наличии антигена D, контакт эритроцитов с реагентом при перевертывании следует проводить не менее 3 мин;

для исключении неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и перемешивают, не взбалтывая, путем 2-3 -кратного перевертывания пробирки;

оценку производят визуально.

14) анализ ПСС. Опыт Станиуса.
Обездвиж.ляг избегая сил.кровотеч.обнаж.сердце и перевяз.первой лигатурой обе дуги аорты после чего перерез.их выше места перевязки. Подсчит.число сокращ.в одну мин. Запрокид.сердце и наход.границу синуса на его дорс.стороне. Пров.лигат.подвеноз.

синус и на границе между син.и предс.делаем перевязку. ( первая лиг.станиуса) . Частота сокращ.венозн.синуса не меняется, а предс и желуд.останавл. Подсчит.число сокращ.венозного синуса. Если после первой лигатуры сокращ.предс и жел.не восстан.самост., то дел 2 перевяз. ( 2 лиг.станиуса) отдел предс от жел.

Теперь, буд сокр веноз синус и жел. Частота сокращ его будет более редкой по отн к перв. Затем деляют 3 перевязку( 3 лиг.станиуса) отдел яя от всего сердца нижнюю треть жел. ( верхушку сердца) , кот перест.сокращ. Если отрезать верхушку сердца и поместить в каплю р-а Рингера , то нанося ей мех.раздраж.

( укол иглой) можно наблюд ее способность сокращ.

Анализ ЭКГ.

Анализ сердечного ритма и проводимости:

1) оценка регулярности сердечных сокращений;

2) подсчет ЧСС;

3) определение источника возбуждения;

4) оценка функции проводимости.

II. Определение поворотов сердца вокруг переднезадней, продольной и поперечной осей:

1) определение положения электрической оси сердца во фронтальной плоскости;

2) определение поворотов сердца вокруг продольной оси;

3) определение поворотов сердца вокруг поперечной оси.

III. Анализ предсердного зубца Р.

IV. Анализ желудочкового комплекса QRST:

1) анализ комплекса QRS;

2) анализ сегмента RS–Т;

3) анализ зубца Т;

4) анализ интервала Q–Т.

V. Электрокардиографическое заключение.

Анализ регулярности сердечных сокращений

Регулярность сердечных сокращений оценивается при сравнении продолжительности интервалов R–R между последовательно зарегистрированными сердечными циклами. Интервал R–R обычно измеряется между вершинами зубцов R (или S).

Подсчет ЧСС.

При правильном ритме ЧСС определяют по формуле:

ЧСС=60/R–R

где 60 — число секунд в минуте, R–R — продолжительность интервала, выраженная в секундах.

Рефлекс Гольца.

Это уменьшение частоты сердечных сокращений или даже полная остановка сердца при раздражении механорецепторов органов брюшной полости или брюшины.

Рефлекс Ашнера-Даниини.

Глазосердечный рефлекс— уменьшение пульса на 4-8 сердечных сокращений в минуту при надавливании на глазные яблоки. Рефлекс обусловлен связями тройничного и блуждающего нервов парасимпатической нервной системы.

Афферентные пути идут по глазничной ветви тройничного нерва, хотя обнаружены пути и по верхне- и нижнечелюстной ветвям.[1] Эти афферентные пути образуют синаптические связи с висцеральным двигательным ядром блуждающего нерва, расположенного в ретикулярной формации ствола мозга.

Эфферентные пути в составе блуждающего нерва идут от сердечно-сосудистого центра продолговатого мозга к сердцу. Повышенная стимуляция этого центра приводит к подавлению функции синусового узла.[2] Этот рефлекс особенно выражен у новорождённых и детей.

Его следует учитывать во время офтальмохирургической операции у детей, особенно при коррекции косоглазия.[3] Брадикардия, несинусовый ритм, асистолия и очень редко смерть[4] могут быть вызваны этим рефлексом.

Пневмотахометрия.

Это метод функционального исследования лёгких с оценкой проходимости бронхов по величине объёмной мощности вдоха и выдоха с помощью пневмотахометра.

Исследования пневмотахометрии дают возможность диагностировать наличие скрытых (ранних) нарушений бронхиальной проходимости, о чём свидетельствует снижение показателей пневмотахометрии по сравнению с нормой на 15%.

Регистрация параметров воздушной струи вдыхаемого и выдыхаемого воздуха на протяжении дыхательного цикла проводится с помощью пневмотахографа.

Пневмотахометрию используют также для оценки динамики течения бронхолёгочных заболеваний и более точного суждения об эффективности лечения.

Определение остроты зрения.

Для исследования остроты зрения используют специальные таблицы, содержащие буквы, цифры или значки различной величины, а для детей – рисунки. Их называют оптотипами. таблица имеет 12 рядов букв или знаков, величина которых постепенно уменьшается от верхнего ряда к нижнему.

В построении таблицы использована десятичная система: при прочтении каждой последующей строчки острота зрения увеличивается на 0.1 Справа от каждой строчки указана острота зрения, которой соответствует распознавание букв в этом ряду. Слева против каждой строки указано то расстояние, с которого детали этих букв будут видны под углом зрения 1’, а вся буква- под углом зрения 5’.

Так, при нормальном зрении, принятом за 1.0, верхняя строка будет видна с расстояния 50 м, десятая- с расстояния 5 м.

метод получения плазмы и сыворотки крови.

ПОЛУЧЕНИЕ ПЛАЗМЫ: Кровь кролика собирают в стеклянный стаканчик с 3,8р-ом цитрата натрия (соотношение консерванта и крови 1:9) . Кровь разливают в центрифужные пробирки уравновешивая их. Центрифугируют при 1000 об/мин 20мин. Плазму переносят в пенициллиновые флаконы и используют для дальнейших исследований.

ПОЛУЧЕНИЕ СЫВОРОТКИ :Кровь кролика собирают в несколько центрифужных пробирок и перемешивают пастеровской пипеткой …Процедуру периодически повторяют. Ставят пробирки в холодильник на 1 час при температуре 4 градуса. уравновешивают пробирки и цетрифугируют 20мин при 1000 об/мин.

Сыворотку крови переносят в пенициллиновые флаконы.22:48:38

Рекомендуемые страницы:

Источник: https://lektsia.com/2x17df.html

Работа 2. Получение плазмы, сыворотки, фибрина и дифибринированной крови

Способы получения плазмы и сыворотки крови гематокрит

КРОВЬ- жидкаясоединительная ткань, которая состоитиз жидкой части – плазмыи находящихся в ней во взвешенномсостоянии, форменныхэлементов– эритроцитов,лейкоцитов и тромбоцитов.

Получение плазмы

Дляполучения плазмы кровь необходимопредохранить от свёртывания добавлениемантикоагуляторов– веществ,препятствующих свертыванию крови(гепарин, лимонно – кислый натрий).

СТАБИЛИЗИРОВАННАЯКРОВЬ – кровь, предохраненная от свертывания.В пробиркуили стеклянный цилиндр с антикоагуляторомвыпустить по 10 мл крови из яремной веныживотного. Закрыв сосуд пальцем илипробкой, несколько раз перевернуть егодля перемешивания крови.

1способ.Цилиндр поставить в термостат кровьлошади – на 1 час, крупного рогатогоскота – на 24…48 часов.

2способ. Пробирку с взятой кровью поставить вцен­трифугу. Центрифугировать при3000 об/мин в течение 20…30 минут.

Убедиться,что при стоянии или центрифугированиикровь расслаивается на плазму и форменныеэлементы (рис. 3).

Рис.3. Состав стабилизированной крови.

1– плазма; 2 – слой лейкоцитов; 3 – слойэритроцитов.

Получениесыворотки

Есливыпущенную в сосуд кровь не стабилизироватьантикоагулятором, происходит еесвертывание и образуется сгусток,содержащий форменные элементы и выпавшийв осадок белок фибриноген.

Сгустокпостепенно уплотняется, стягивается иот него отделяется прозрачная желтоватогоцвета жидкость – сыворотка(происходитпроцесс ретракции)(рис. 4).

Рис.4. Ретракция кровяного сгустка.

1- сыворотка крови; 2- сгусток крови.

СЫВОРОТКА- представляетсобой плазму, лишенную белка фибриногенаи других веществ, участвующих в свертываниикрови.

1способ. Впробирку или цилиндр без антикоагуляторавыпустить 10 мл крови животного и поставитьее в термостат при 38°С на несколькочасов. Образование кровяного сгусткаи частич­ная ретракция,т.е.

его стягивание и самопроизвольноеотделение сыворотки наступает у лошадейчерез 1…3часа, а полное отделение сгусткачерез 12…18 часов. У крупного рогатогоскота ретракция протекает значительномедленнее.

Из пробирки, с полной ретракциейсгустка, слить или отсосать сывороткуи сравнить ее с плазмой. Сыворотка имеетжелтовато-соломенный цвет и болеепрозрачна, чем плазма.

2способ получения сыворотки.При выделении из крови фибриногенамеханическим путем, получают кровь,которая содержит все составные части,кроме белка фибриногена – ДЕФИБРИНИРОВАННУЮКРОВЬ, т. е. эта кровь, теряет способностьк свертыванию. Состав дефибринированнойкрови (рис.5).

Рис.5. Состав дефибринированной крови.

1- сыворотка; 2- слой лейкоцитов; 3- слойэритроцитов.

Получениедефибринированной крови

Дефибринированнуюкровь разлить в центрифужные пробиркии центрифугировать при 3000 об/мин втечение 10…15 минут. Форменные элементыоседают на дно. Сверху окажется сыворотка.Иногда она приобретает красноватыйоттенок, вследствие разрушений эритроцитовиз дефибринированной крови.

Получениефибрина

Положитьв стеклянную колбочку 10…12 стеклян­ныхбусинок и выпустить в нее из сосудаживотного 20…30 мл крови. Взбалтыватькровь вращательными движениями в течение10…15 минут.

Фибриноген, выпадающий восадок в виде волокнистых нитей фибрина,оседает на шариках. Затем профильтроватьсодержимое колбы через 2 слоя марли.

Фильтрат представляет собойдефибринированную кровь, а осевшие нашариках “метелки” – нити фибрина -отмыть от форменных элементов водой.Фибрин имеет вид белого волокнистоговещества.

Работа3. Определение скорости свёртываниякрови

приразных температурных условиях

СВЕРТЫВАНИЕкрови -сложный биологический процесс, протекающийпри участии солей кальция, витамина К,ферментов тромбопластина, промбина идругих компонентов плазмы (рис. 6).

Нанести по однойкапле крови, вытекающей из надрезанногоуха животного, на три предметных стекла.Одно стекло поместить в термостат при+40оС,другое стекло положить на стол (прикомнатной температуре), третье – на снег.

Через каждую минутунаклонять стекла с кровью и повторятьдо тех пор, пока кровь не свернется.Определить скорость свертывания кровиу различных животных.

Данные записатьв тетрадь, проанализировать.

ВОПРОСЫ:

1.Где, у животных, берут большое и малоеколичество крови для анализа.

2.Что такое плазма и как ее получить?

3.Дайте понятие сыворотке, какие естьспособы ее получения.

4.Что такое дефибринированная кровь икаков ее состав?

5. В чем заключаетсямеханизм свертывания крови, и, какиефакторы влияют на него?

Рис.6. Классическая схема свертывания кровиШмидта – Моравица.

ЗАНЯТИЕ2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЪЕМНОГО СООТНОШЕНИЯФОРМЕННЫХ ЭЛЕМЕН­ТОВ И ПЛАЗМЫ.ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВЯЗКОСТИ КРОВИ. ГЕМОЛИЗ.ОСМОТИЧЕСКАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ (УСТОЙЧИВОСТЬЭРИТРОЦИТОВ)

ЦЕЛЬЗАНЯТИЯ:Определитьсоотношение форменных элементов иплазмы в крови животных, вязкость крови,проследить за явлением гемолизаэритроцитов под влиянием повреждающихфакторов с разным механизмом действия,определить осмотическую устойчивостьэритроцитов разных видов животных.

Работа1. Определение объёмного соотношенияформенных

элементови плазмы (показатель гематокрита)

Форменные элементы– 35…45%., плазма составляет 60…65% общегообъема крови. Это соотношение изменяетсяв зависимости от вида, возраста, породыживотных, функционального состояния,а также при некоторых заболеваниях.

ПОКАЗАТЕЛЬГЕМАТОКРИТА– показывает общий объем форменныхэлементов в 100 объемах крови. Показательгематокрита используется при вычисленииряда других важных характеристик крови(среднего объема эритроцитов,среднеклеточной концентрации гемоглобинаи пр.).

Набрать черезузкий конец капиллярной трубочкигематокрита стабилизированную кровьживотного. Трубки затянуть резинкамии поставить в центрифугу. Центрифугировать8…10 мин при 3000 об/мин. Извлечь капилляры.

Форменные элементы располагаются водной стороне капилляра, а плазма вдругой. По показателям капилляров взятьсреднее из двух, определить относительныйобъем форменных элементов и плазмы,выразив их в процентах.

Источник: https://studfile.net/preview/1151260/page:48/

ЛечениеСосудов
Добавить комментарий